農(nóng)殘級(jí)正戊烷價(jià)格,彪仕奇帶您來(lái)了解高效液相色譜法的系統(tǒng)組成。
梯度洗脫裝置
HPLC有等強(qiáng)度(isocratic)和梯度(gradient)洗脫兩種方式。等度洗脫是在同一分析周期內(nèi)流動(dòng)相組成保持恒定,適合于組分?jǐn)?shù)目較少,性質(zhì)差別不大的樣品。梯度洗脫是在一個(gè)分析周期內(nèi)程序控制流動(dòng)相的組成,如溶劑的極性、離子強(qiáng)度和pH 值等,用于分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差異較大的復(fù)雜樣品。采用梯度洗脫可以縮短分析時(shí)間,提高分離度,改善峰形,提高檢測(cè)靈敏度,但是常常引起基線漂移和降低重現(xiàn)性。兩種溶劑組成的梯度洗脫可按任意程度混合,即有多種洗脫曲線:線性梯度、凹形梯度、凸形梯度和階梯形梯度。線性梯度最常用,尤其適合于在反相柱上進(jìn)行梯度洗脫。
線性梯度:在某一段時(shí)間內(nèi)連續(xù)而均勻增加流動(dòng)相強(qiáng)度。
階梯梯度:直接從某一低強(qiáng)度的流動(dòng)相改變?yōu)榱硪惠^高強(qiáng)度的流動(dòng)相。
梯度洗脫有兩種實(shí)現(xiàn)方式:低壓梯度(外梯度)和高壓梯度(內(nèi)梯度)。高壓梯度一般只用于二元梯度,即用兩個(gè)高壓泵分別按設(shè)定的比例輸送A和B兩種流動(dòng)相至混合器。具有精度高,易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化控制的優(yōu)點(diǎn)。
低壓梯度只需一個(gè)高壓泵,與等度洗脫輸液系統(tǒng)相比,就是在泵前安裝了一個(gè)比例閥,混合就在比例閥中完成。在常壓下混合往往容易形成氣泡,所以低壓梯度通常配置在線脫氣裝置。
進(jìn)樣系統(tǒng)
早期使用隔膜和停流進(jìn)樣器,裝在色譜柱入口處。現(xiàn)在大都使用六通進(jìn)樣閥或自動(dòng)進(jìn)樣器。進(jìn)樣裝置要求:密封性好,死體積小,重復(fù)性好,保證中心進(jìn)樣,進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。
一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥,六通閥的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。
①部分裝液法進(jìn)樣:進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%(最多75%),并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同。此法進(jìn)樣的準(zhǔn)確度和重復(fù)性決定于注射器取樣的熟練程度,而且易產(chǎn)生由進(jìn)樣引起的峰展寬。
②完全裝液法進(jìn)樣:進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的5~10 倍(最少3倍),這樣才能完全置換定量環(huán)內(nèi)的流動(dòng)相,消除管壁效應(yīng),確保進(jìn)樣的準(zhǔn)確度及重復(fù)性。
分離系統(tǒng)
分離系統(tǒng)包括色譜柱、保護(hù)柱以及柱溫箱。
色譜柱:色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。色譜填料為經(jīng)過(guò)制備處理后,用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒,通常是5-10粒徑的球形顆粒。色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類,尺寸規(guī)格也不同:
①常規(guī)分析柱(常量柱),內(nèi)徑2~5mm(常用4.6mm,國(guó)內(nèi)有4mm 和5mm),柱長(zhǎng)10~30cm;
②窄徑柱(narrow bore,又稱細(xì)管徑柱、半微柱semi-microcolumn),內(nèi)徑1~2mm,柱長(zhǎng)10~20cm;
③毛細(xì)管柱(又稱微柱microcolumn),內(nèi)徑0.2~0.5mm;
④半制備柱,內(nèi)徑>5mm;
⑤實(shí)驗(yàn)室制備柱,內(nèi)徑20~40mm,柱長(zhǎng)10~30cm;
⑥生產(chǎn)制備柱:內(nèi)徑可達(dá)幾十厘米。
保護(hù)柱:保護(hù)柱的作用主要是防止吸附性強(qiáng)的雜質(zhì)對(duì)色譜柱污染,從而延長(zhǎng)色譜柱的壽命。針對(duì)不同型號(hào)的色譜柱,應(yīng)選擇相對(duì)應(yīng)填料的保護(hù)柱。應(yīng)注意柱芯也是有壽命的,應(yīng)該定期進(jìn)行更換。
柱溫箱:維持色譜柱溫度的恒定,以免造成保留時(shí)間的變化,保證分離效果的穩(wěn)定性。
檢測(cè)器
檢測(cè)器是用來(lái)連續(xù)監(jiān)測(cè)經(jīng)色譜柱分離后的流出物的組成和含量變化的裝置,是HPLC 儀的三大關(guān)鍵部件之一。HPLC的檢測(cè)器要求靈敏度高、噪音低(即對(duì)溫度、流量等外界變化不敏感)、線性范圍寬、重復(fù)性好和適用范圍廣。
數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
該系統(tǒng)可對(duì)測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作,使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。
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